Produkt-Name
Gattungsbezeichnung: Nukleinsä Ure-Extraktion-Installationssatz
Handelsname: Viren-DNA/RNA schneller Extraktion-Installationssatz (Spinnen-Spalte)
Verpackung
DP4611 (50 Vorbereitungen) /DP4612 (100 Vorbereitungen) /DP4613 (200 Vorbereitungen)
Beabsichtigter Gebrauch
Fü R Lokalisierung und Reinigung des Qualitä Tsvirus DNA/RNA von den Zellen, Blut,
Serum, Plasma, Lymphe, acellular Flü Ssigkeit, schwimmendes oder verschiedenes Virus der Zellkultur
Erhalt der Flü Ssigkeit.
Grundregel
Der Installationssatz trä Gt die eindeutige verbindliche Buffer Protease K auf, um Nuklease des Virus schnell aufzulö Sen
und Virus inaktivieren. Dann absorbiert Genom DNA und RNS selektiv zu silicified
Membrane in der hohen Salzlö Sung. Verunreinigungen wie zellulares Stoffwechselprodukt und Proteine etc.
werden durch eine Reihe Eluierungzentrifugierungjobsteps entfernt. Schließ Lich gereinigt
Genom DNA und RNS wird von der Silikonmembrane durch schwach gesalzenen Eluierungbuffer EB eluiert.
Speicherung und Gü Ltigkeit
1. Proteinase K (trockenes Puder) wird unter -20± 5º C gespeichert; Buffer RW kann darunter gespeichert werden
2~8º C fü R einen Monat und -20± 5º C fü R ein Jahr; Andere Bauteile werden darunter gespeichert
Raumtemperatur.
2. Dieser Installationssatz ist fü R ein Jahr gü Ltig. Ihn innerhalb seiner Gü Ltigkeit bitte verwenden.
Anwendbare Instrumente
Dieses Modell ist fü R BioTeke CR3180 benchtop gekü Hlte Hochgeschwindigkeitszentrifuge geeignet
und ä Hnliche Instrumente.
Bedingungen fü R Proben
Frische Proben oder Proben bitte verwenden, die richtig gespeichert werden. Wir schlagen Experimente vor
durchgefü Hrt sein, sobald die Proben montiert werden. Proben bei º C 2~8 bitte speichern
vorü Bergehend oder an -20º C oder an -80º C fü R langfristige Konservierung.
Prozeduren
* Absoluten Ä Thylalkohol in waschende Buffer WB bitte hinzufü Gen, wie spezifiziert
vor Gebrauch!
Vorbereitung von Proteinase K:
1000μ L des Laborwassers in jedem Stü Ck Proteinase K (trockenes Puder) (der Schluss hinzufü Gen
Konzentration ist 40mg/mL). Sie gedreht 10 Zeiten mischen, bis sie vollstä Ndig aufgelö St ist.
Sie an 2~8º C fü R kurzfristigen Verbrauch und -20 bitte speichern± 5º C fü R langfristige Lagerung. Vermeiden
wiederholtes Frieren-Tauen fü R mehr als fü Nfmal.
1.200μ L der flü Ssigen Probe (Serum, Plasma, Blut etc. ) in ein Gefä ß Der Zentrifuge hinzufü Gen 1.5mL.
Fü R Anfangsdatenträ Ger der flü Ssigen Probe fü Gen kleiner als 200μ L, bitte hinzu 1× PBS bis es ist200μ L. Wenn Anfangsdatenträ Ger zwischen 200μ L-300μ L ist, Reagenzien bitte hinzufü Gen
proportional in den nachfolgenden Prozeduren. Fü R Gewebeproben bitte reiben
zuerst Gebrauch 200μ L von Buffer lbs, und ihn Viruszerstö Rungbuffer dann hinzuzufü Gen erneut auszusetzen.
2. Hinzufü Gen 500μ L des Viruszerstö Rungbuffers VL1.20μ L der Lö Sung der Proteinase K (40mg/mL) hinzufü Gen.
Fü R 15 Sekunden fü R das genü Gende Mischen rü Tteln. Dann bei 65 ausbrü Tenº C fü R 15min. Wä Hrend
Ausbrü Tung, mischen es bitte auf und ab fü R 3-4mal.
3. Ä Thylalkohol 300µ L hinzufü Gen absoluten und dann ihn auf und ab rü Tteln, um zu mischen
gä Nzlich.
Korrekte Stä Rke und gä Nzlich Mischung ist in den oben genannten Prozeduren sehr wichtig.
Das unzureichende Mischen ergibt niedrigen Ertrag Nukleinsä Ure.
4. Die Lö Sung und den geflockten Niederschlag (wenn es gibt), in eine Drehbeschleunigungspalte ü Bertragen
VI (Drehbeschleunigungspalte im Ansammlungsgefä ß ). An 10, 000rpm fü R 30s zentrifugieren, und leeren
im Ansammlungsgefä ß Filtrieren.
5.700µ L des Buffers RW hinzufü Gen (bitte sicherstellen, dass absoluter Ä Thylalkohol vor Gebrauch hinzugefü Gt wird)
und Zentrifuge an 12, 000rpm fü R 30s. Filtrat verwerfen.
6.500µ L des Buffers RW hinzufü Gen (bitte sicherstellen, dass absoluter Ä Thylalkohol vor Gebrauch hinzugefü Gt wird)
und Zentrifuge an 12, 000rpm fü R 30s. Filtrat verwerfen.
7. Die Drehbeschleunigungspalte VI zurü Ck zu dem Ansammlungsgefä ß Und -zentrifuge an 13, 000rpm fü R setzen
2 Min. Entfernen waschenden Buffer, wenn mö Glich. Andernfalls beeinfluß T das ü Brig gebliebene Ä Thanol
die folgende Reaktion.
8. Die Drehbeschleunigungspalte VI auf ein neues Zentrifugegefä ß ü Bertragen und vorgewä Rmtes 30-50µ L hinzufü Gen
(65 º C - 70º C Wasserbad ) Buffer EB zu Mitte des Aufnahmefilmes. Ihn an platzieren
Raumtemperatur fü R 2min. Zentrifuge an 12, 000rpm fü R 1min. Lö Sung in Drehbeschleunigung hinzufü Gen
Spalte und platzieren sie bei Zimmertemperatur fü R 2min. Zentrifuge an 12, 000rpm fü R 1min.
9. DNA kann bei 2-8 gespeichert werdenº Cund -20º C fü R langfristige Lagerung. Aufzuheben ist besser
RNS in cfDNA ü Bertragen oder RNS bei -80 speichernº C.
Leistung
1. Dieser Installationssatz kann verwendet werden, um Nukleinsä Ure vom Blut, vom Plasma und vom Serum zu extrahieren
effektiv
2. Die Resultate des Installationssatzes sind bestä Ndig und haben gute Wiederholbarkeit.
Aufmerksamkeit
1. Ä Thanol im Buffer RW bitte hinzufü Gen, wie vor Gebrauch spezifiziert (60mL PF Ä Thanol innen hinzufü Gen
Ä Thanol 15mL RW oder 100mL im Ä Thanol 25mL RW oder 200mL in 50mL RW) und mischen
es oben gä Nzlich). Bitte ü Berprü Fen, um das wiederholte Hinzufü Gen zu vermeiden! 2. Zu verringerte Aktivitä T vermeiden und Transport erleichtern, soll Protease K
zur Verfü Gung gestellt als trockenes Puder. Nach dem Empfang bitte kurz zentrifugieren und 1mL hinzufü Gen
steriles Wasser zum sich aufzulö Sen (die abschließ Ende Konzentration ist 40mg/mL). Wie wiederholter Frost
und Tauwetter wü Rde Proteaseaktivitä T verringern. Bitte aufgespaltete Pakete (20μ L pro
Paket) sofort nach Auflö Sung und speichern unter -20º C.
3. Die Kappe bitte fest abdecken, wenn Sie using Lö Sungen beendet werden, um Verflü Chtigung zu vermeiden,
Oxidation und Ä Nderung der pH-Werte nach langer Belastung durch Luft