Einleitung:
4-Hydroxyethylpiperazin Ethosulfonsäure (HEPES) ist ein wichtiger Wasserstoff-Ionenpuffer, der eine gute Pufferfähigkeit im pH-Bereich von 6,8 bis 8,2 hat und einen konstanten pH-Wert über lange Zeit steuern kann. Bei einer Konzentration von 10 ~ 50mmol/L kann das 20mmol/L 4-Hydroxyethylpiperazin Taurin enthaltende allgemeine Kulturmedium eine gute Pufferkapazität haben und keine toxische Wirkung auf Zellen haben.
Anwendung:
HEPES (4-Hydroxyethyl-Piperazinethesulfonsäure) ist ein nicht-ionischer amphoterer Puffer mit hoher Polarität und inert gegenüber einer Vielzahl chemischer Reagenzien und Enzymen. Es nimmt nicht an biochemischen Reaktionen Teil und beeinträchtigt diesen Prozess nicht und hat keine hemmende Wirkung auf enzymatische chemische Reaktionen. Daher kann es speziell für die Erforschung von Proteinen und Enzymen verwendet werden, die hochflüchtig und ph-empfindlich für Organellen und sehr flüchtig sind.
Vorbereitung der Pufferlösung:
(1)hepes-Puffer kann dem vorbereiteten Nährmedium entsprechend der gewünschten Konzentration direkt zugegeben und dann gefiltert werden, um Bakterien zu entfernen. 2,38 g HEPES wurden zu je 1000ml Kulturmedium zugegeben, der pH-Wert wurde nach Auflösung mit lNNaOH auf 7,2 eingestellt und die Bakterien wurden vor der Anwendung durch Filtration entfernt. Zu diesem Zeitpunkt lag die Konzentration von HEPES bei 10mmol/L.
(2) 100x Speicherlösung (lmol/l) könnte ebenfalls vorbereitet werden. Vor der Verwendung wurde der lml-Speicherlösung 99ml Kulturlösung zugegeben und die Endkonzentration betrug 10mmol/L. lmol/L (100x) hepes-Puffer wurde wie folgt vorbereitet: 23,8gHEPES wurde in 90ml doppelt destilliertem Wasser aufgelöst, der pH-Wert wurde mit lNNaOH auf 7,5-8,0 eingestellt, und dann wurde das Wasser auf 100ml fixiert, gefiltert, um Bakterien zu entfernen, in Fläschchen (2ml/Flasche) geteilt und bei 4ºC oder -20ºC gelagert.
Zweck:
1.Biological Puffer; Reaktionspuffer, Prähybridisierungspuffer und Hybridisierungspuffer für Isolierung und Analyse von RNA Kernfraktion; für RNA mit T4RNA
2.Molecular Biology Grad wird für RNA3' -Ende Kennzeichnung mit verwendet T4 RNA-Ligase
3.Zelle-Zelle Adhäsion, kurzfristige Zellaggregationskultur, Reinigung von Gewebe und Zellpuffer