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[Verwendungszweck]
Monkeypox Virus Nukleinsäure Detection Kit (Fluorescence PCR) wird für den Nachweis von Nukleinsäure aus Monkeypox-Virus in Serum und menschliche Pustular oder vesikuläre Ausschlag Proben von Personen, die Verdacht auf Monkeypox-Virus infektiös. Durch den spezifischen Nachweis der Nukleinsäurefragmente des Monkeypox-Virus kann das Monkeypox-Virus schnell identifiziert werden, was für die schnelle Diagnose verwandter Krankheiten geeignet ist, die durch eine Monkeypox-Virusinfektion verursacht werden.
[Verpackungsspezifikation]
25 Tests/Box, 50 Tests/Box
| NEIN | Komponenten | 25tests/Satz | 50tests/Satz | Hauptkomponenten |
| 1 | MPV-PCR-Detektionsmischung | 950μL/Rohr, 1tube | 950μL/Rohr, 2 Röhrchen | Primer, Sonden, dNTPs, PCR-Puffer usw. |
| 2 | MPV-Enzym-Gemisch | 50μL/Rohr,1tube | 100μL/Rohr, 1tube | H-Taq, ung |
| 3 | MPV-Positivkontrolle | 500μl/Rohr,1tube | 500μl/Rohr,1tube | Klonen von Plasmiden für Zielgen-Fragmente |
| 4 | MPV-Negativkontrolle | 500μl/Rohr,1tube | 500μl/Rohr,1tube | Sterilisierte Kochsalzlösung |
Hinweis:
1.Kits mit verschiedenen Chargennummern sind nicht austauschbar.
2.Alle biologischen Proben im Kit wurden gelöscht.
[Beispielanforderung]
1.Probentyp
Proben von Serum- und humanem Pustular- oder Blasenausschlag.
2.Probenentnahme
Serum: Mit einer sterilen Spritze 2ml der Probanden venöses Blut entnehmen, in ein sterile Probenröhrchen injizieren, bei Raumtemperatur nicht mehr als 4 Stunden liegen lassen, auf die Trennung der Probe aus dem Serum warten, Oder bei Raumtemperatur 4000 Minuten lang bei 5 U/min zentrifugieren, um das Serum zu trennen und in ein 1,5ml-steriles Ersatzzentrifugenröhrchen zu geben Probenentnahme von Vesikeln und Pusteln: Frische Vesikel oder Pusteln auf der Haut auswählen, mit Jodophor desinfizieren und dann mit 70%igem Alkohol abwischen. Nach dem vollständigen Verdampfen des Alkohols die Gewebeflüssigkeit mit einer sterilen Nadel durchstechen und herausdrücken, den Wattestäbchen in die Flüssigkeit tauchen, den Wattestäbchen schnell in das 3-5 ml Probenröhrchen mit der Konservierungslösung geben, den Wattestäbchen in der Nähe der Oberseite zerbrechen, Die Schlauchkappe festziehen und zur Inspektion verschließen.
3. Probenlagerung und Versand
Die gesammelten Proben sollten sofort zur Prüfung eingesandt werden. Proben sollten bei Lagerung bei 2ºC bis 8ºC innerhalb von 24 Stunden getestet werden. Proben, die nicht innerhalb von 24 Stunden getestet werden können, sollten bei -70 C oder darunter gelagert werden (bei Nichtbelagerung von 70ºC 25ºC können Proben 15ºC Tage lang bei -10 bis - gelagert werden). Mehrere Einfrieren/Auftauzyklen sollten vermieden werden. Die Proben sollten in einem versiegelten gefrorenen Krug mit Eis oder in einem versiegelten Schaumstoffkasten mit Eis transportiert werden.
[Testmethode]
Bitte lesen Sie vor der Verwendung die Anweisungen des Testkits.
1.Reagenzienvorbereitung (im Bereich der Reagenzienvorbereitung)
1,1 die Komponenten in der Box herausnehmen und bei Raumtemperatur platzieren. Nachdem die Temperatur auf Raumtemperatur abgeglichen wurde, gut mischen und kurz für den späteren Gebrauch zentrifugieren. Je nach Anzahl der zu testenden Proben, Negativkontrollen und Positivkontrollen die entsprechende Menge an Komponenten im Verhältnis (38μL/Person der MPV-PCR-Reaktionslösung + 2μL/Person der MPV-Enzym-Mischung) nehmen und diese gründlich zu einer PCR-Mischung mischen. Liquid-1, das nach sofortiger Zentrifugation verwendet wurde.
1,2 die oben vorbereiteten Reagenzien zur Verwendung in den Probenverarbeitungsbereich geben.
2.Probenverarbeitung (im Bereich der Probenverarbeitung)
2,1 Probenextraktion:
Für die Probenextraktion sollte ein Nukleinsäureextraktionskit verwendet werden.
Negativkontrolle, Positivkontrolle und zu testende Proben werden gleichzeitig verarbeitet.
2,2 Probe hinzufügen
Fügen Sie 10μL extrahierte DNA in der folgenden Reihenfolge zu PCR-Röhrchen hinzu: MPV-Negativkontrolle, MPV-Positivkontrolle und Probe, die getestet werden soll. Fügen Sie 40μL MPV-Mastermix zu jeder Well hinzu. Jeder Brunnen wurde verschlossen. Zentrifugiert bei 2000 rpm für 10 Sekunden, und auf einem fluoreszierenden PCR-Maschine platziert.
3.PCR Amplifikation (im Amplifikations- und Analysenbereich)
Die Einstellungen finden Sie in der Bedienungsanleitung der einzelnen Geräte.
3,1 die PCR-Reaktionsröhrchen, die das Hinzufügen von Proben abgeschlossen haben, in das Fluoreszenz-PCR-Instrument einsetzen, Testlöcher gemäß der entsprechenden Sequenz des Hinzufügen von Proben einstellen, Testlöcher für positive Qualitätsprodukte, negative Qualitätsprodukte und unbekannte Proben einstellen und den Probennamen festlegen.
3,2 Gesamtreaktionssystem: 25μL
3,3 Fluoreszenzdetektion Kanalauswahl:1) Wählen Sie den FAM-Kanal (Reporter: FAM, Quencher: None), um monkeypox-Virus-Zielgene zu erkennen: 2) Wählen Sie den HEX- oder VIC-Kanal (Reporter: HEX/VIC, Quencher: None); 3)Setzen Sie die Referenzfluoreszenz (Passive Referenz) auf none; Setzen Sie das Sample Volume auf 50.
3,4 Einstellung zyklischer Parameter:
Hinweis: Verwenden Sie das quantitative PCR-Instrument ABI 7500 Rea-Time Fluoreszenz, und wählen Sie bei passiver Referenz und Quencher „Keine“.
4.Ergebnisanalyse
Nach der Reaktion werden die Ergebnisse automatisch gespeichert und die Baseline und der Schwellenwert jedes Detektionskanals entsprechend den analysierten Bildern angepasst. Klicken Sie auf „Analyse“, um die Analyse durchzuführen, damit alle Parameter den Anforderungen der Qualitätskontrolle entsprechen, und überprüfen Sie dann die Nachweisergebnisse jeder unbekannten Probe.
5.Qualitätskontrolle
Negative Kontrollprodukte: FAM Kurve hat keinen CT-Wert oder CT>40; und monkeypox Virus interne Standard-Erkennung (HEX/VIC) hat keinen CT-Wert oder CT>40.
Positive Kontrollprodukte: FAM Kurve CS35; und monkeypox Virus interne Standarddetektion (HEX/VIC) ist positiv, CT≤35.
wenn die beiden oben genannten Punkte gleichzeitig bei derselben Prüfung erfüllt werden, ist andernfalls die zweite Prüfung als ungültig zu betrachten und eine erneute Prüfung erforderlich.
[Positiver Referenzwert]
Durch die Untersuchung von Referenzwerten wurde festgestellt, dass der Referenzwert des CT des mit diesem Kit ermittelten Zielgens 40 und der Referenzwert des CT des internen Standards 40 betrug.
[Interpretation der Testergebnisse]
1.FAM-Detektions-CT-Wert ≤ 40, und der interne Standarddetektor ist positiv (CT-Wert ≤ 40), gemeldet als Monkeypox-Virus positiv;
2.kein CT-Wert oder CT-Wert > 40 bei FAM-Erkennung, und die interne Standardkanalerkennung ist positiv (CT-Wert ≤ 40), und der Bericht ist negativ für Monkeypox-Virus;
3.wenn im internen Standardtest kein CT-Wert oder CT-Wert > 40 vorhanden ist, ist das Testergebnis der Probe ungültig. Die Ursache sollte gefunden und beseitigt werden, und die Probe sollte erneut beprobt und erneut getestet werden (wenn das Testergebnis des wiederholten Tests immer noch ungültig ist, wenden Sie sich bitte an das Unternehmen).
4.für positive Proben ist das interne Standardtestergebnis nicht erforderlich; für negative Proben sollte der interne Standardtest positiv sein. ist der interne Standardtest negativ, ist das Testergebnis der Probe ungültig. Proben werden erneut beprobt und wiederholte Experimente durchgeführt (sollten die Testergebnisse wiederholter Experimente noch ungültig sein, kontaktieren Sie bitte unser Unternehmen).
[Positiver Referenzwert]
Durch die Untersuchung von Referenzwerten wurde festgestellt, dass der Referenzwert des CT des mit diesem Kit ermittelten Zielgens 40 und der Referenzwert des CT des internen Standards 40 betrug.
[Interpretation der Testergebnisse]
1.FAM-Detektions-CT-Wert ≤ 40, und der interne Standarddetektor ist positiv (CT-Wert ≤ 40), gemeldet als Monkeypox-Virus positiv;
2.kein CT-Wert oder CT-Wert > 40 bei FAM-Erkennung, und die interne Standardkanalerkennung ist positiv (CT-Wert ≤ 40), und der Bericht ist negativ für Monkeypox-Virus;
3.wenn im internen Standardtest kein CT-Wert oder CT-Wert > 40 vorhanden ist, ist das Testergebnis der Probe ungültig. Die Ursache sollte gefunden und beseitigt werden, und die Probe sollte erneut beprobt und erneut getestet werden (wenn das Testergebnis des wiederholten Tests immer noch ungültig ist, wenden Sie sich bitte an das Unternehmen).
4.für positive Proben ist das interne Standardtestergebnis nicht erforderlich; für negative Proben sollte der interne Standardtest positiv sein. ist der interne Standardtest negativ, ist das Testergebnis der Probe ungültig. Proben werden erneut beprobt und wiederholte Experimente durchgeführt (sollten die Testergebnisse wiederholter Experimente noch ungültig sein, kontaktieren Sie bitte unser Unternehmen).
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